#' shell script for benchmarking
#' @param reps number of replicate communities
#' @param commonN number of common species
#' @param groupN number of unique taxa to groups
#' @param singleN number of unique taxa to samples
#' @param D average sampling depth
#' @param V variation in sampling depth
#' @param method list of function names to be used in analysis
#' @keywords benchmark
#' @export
#' @examples test.script<-benchmark.MM(reps=3, commonN=20, groupN=10, singleN=10, D=2000, V=1000)
#'benchmark.MM()
BENCHMARK.MM<-function(reps, commonN, groupN, singleN, D, V, method, interact){
require(phyloseq)
#require(ModelMicrobiome)
require(limma)
require(DESeq2)
require(vegan)
array<-c(rep(commonN, reps))
names(array)<-c(paste0("rep", 1:reps, sep=""))
array<-sapply(array, run.analysis2, simplify=F, USE.NAMES = T, groupN, singleN, D, V, method)
array
}
#' workhorse function for BENCHMARK.MM
#' @param commonN number of common species
#' @param groupN number of unique taxa to groups
#' @param singleN number of unique taxa to samples
#' @param D average sampling depth
#' @param V variation in sampling depth
#' @param method list of function names to be applied as normalization
#' @keywords benchmark
#' @export
#' @examples
#' run.analysis2()
run.analysis2<-function(commonN, groupN, singleN, D, V, method, interact){
AllSpp<-c(paste0("spp", c(1:700), sep="")) # make a quick list of all species functions
AllSpp<-lapply(AllSpp, get) # connect function to name
AllSpp<-unlist(AllSpp) # format to be read by downstream functions
names(AllSpp)<-c(paste0("spp", c(1:700)))
# Define list of 5 species w/ global distribution
global.spp<-names(sample(AllSpp, commonN, replace=F))
# define list of species w/ regional distribution
group.spp<-NULL
group.spp$group1<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group2<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group3<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group4<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group5<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group6<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
# define list of species found at each site
rando.spp<-NULL
rando.spp$Site1<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site2<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site3<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site4<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site5<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site6<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site7<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site8<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site9<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site10<-unique(c(names(sample(AllSpp,singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site11<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site12<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site13<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site14<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site15<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site16<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site17<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site18<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site19<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site20<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site21<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site22<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site23<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site24<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site25<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site26<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
rando.spp$Site27<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
rando.spp$Site28<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
rando.spp$Site29<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
rando.spp$Site30<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
# make list of unique species arrays
library(reshape2)
f1c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f1c2<-c(1,3,10,30,60,15) # mean value of selections
f1c3<-c(0.5,1,4,10,20,5) # SD of selections
F1.frame<-mapply(rnorm, f1c1,f1c2,f1c3) # pick Factor 1 value for each site
F1<-reshape2::melt(F1.frame)
#F2
f2c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f2c2<-c(34,30,10,55,35,60) # mean value of selections
f2c3<-c(10,10,3,10,1,20) # SD of selections
F2.frame<-mapply(rnorm, f2c1,f2c2,f2c3) # pick Factor 2 value for each site
F2<-reshape2::melt(F2.frame)
#F3
f3c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f3c2<-c(1,3,10,15,3,15) # mean value of selections
f3c3<-c(0.5,1,3,3,1,5) # SD of selections
F3.frame<-mapply(rnorm, f3c1,f3c2,f3c3) # pick Factor 3 value for each site
F3<-reshape2::melt(F3.frame)
#F4
f4c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f4c2<-c(5,5,5,5,5,5) # mean value of selections
f4c3<-c(1,1,1,1,1,1) # SD of selections
F4.frame<-mapply(rnorm, f4c1,f4c2,f4c3) # pick Factor 4 value for each site
F4<-reshape2::melt(F4.frame)
#F5
f5c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f5c2<-c(50,50,50,50,50,50) # mean value of selections
f5c3<-c(20,20,20,20,20,20) # SD of selections
F5.frame<-mapply(rnorm, f5c1,f5c2,f5c3) # pick Factor 5 value for each site
F5<-reshape2::melt(F5.frame)
Factors<-data.frame(F1$value,F2$value,F3$value,F4$value,F5$value) # combine factors into data table
Sites<-c(paste0("Site", 1:30))
rownames(Factors)<-Sites
colnames(Factors)<-c("F1","F2","F3","F4","F5")
output<-list("model"=NULL, "spplist"=NULL, "raw"=NULL)
output$spplist<-rando.spp
output$model$comm<-make.refcomm(rando.spp, Factors) # output a phyloseq object... will make a list of phyloseq objects
output$model$comm<-filter_taxa(output$model$comm, function(x) sum(x)>0, TRUE)
output$model$EV<-transform_sample_counts(output$model$comm, function(x) x / sum(x) )
output$metrics<-NULL
output$metrics$stats<-NULL
output$metrics$Richness<-NULL
Rich<-estimate_richness(output$model$comm, measures="Observed")
output$metrics$Richness<-Rich
output$metrics$skewness<-median(apply(X = otu_table(output$model$comm), MARGIN=2,FUN = function(x){skewness(x)}))
sample<-set.seqDepth(D,V)
output$raw$comm<-model.rarefy(output$model$comm, sample, D, V)
print("spp selection complete")
sample_data(output$model$comm)$Density<-sample_sums(output$model$comm)# add sample sums
sample_data(output$model$comm)$DensityF<-sample_sums(output$model$comm)/mean(sample_sums(output$model$comm))
sample_data(output$model$comm)$Factor<-as.factor(c(rep("one",5),rep("two",5),rep("three",5),rep("four",5),rep("five",5),rep("six",5)))
sample_data(output$model$comm)$Factor2<-as.factor(c(rep(1,5),rep(2,5),rep(3,5),rep(4,5),rep(5,5),rep(6,5)))
# remove taxa that have zero abundance in "raw" sequencing run
tax.filt<-filter_taxa(output$raw$comm, function(x)sum(x)>0)
output$metrics$tax.lost<-tax.filt
output$raw$comm<-filter_taxa(output$raw$comm, function(x)sum(x)>0, TRUE)
# remove taxa that are not kept from sequencing so that they don't penalize downstream methods
output$model$comm<-prune_taxa(tax.filt, output$model$comm)
output$model$EV<-prune_taxa(tax.filt, output$model$EV)
# for each species: measure prevalence
prevalence=apply(X = otu_table(output$model$comm), MARGIN=1,FUN = function(x){sum(x > 0)})
# for each species: measure relative abundance (proportion of total counts?
p.abund<-transform_sample_counts(output$model$comm, function(x) x/sum(x) )
mean_abundance<-apply(X = otu_table(p.abund), MARGIN=1,FUN = function(x){mean(x)})
sd_abundance<-apply(X = otu_table(p.abund), MARGIN=1,FUN = function(x){sd(x)})
# create a tax table for whole dataset ...
tab<-data.frame(prevalence, mean_abundance, sd_abundance)
tab$names<-rownames(tab)
output$model$SpeciesMeta<-tab
output$model$R<-lm.test(output$model$comm)
output$model$networkStat<-ConnStat(output$model$comm, num=250)
output$raw$networkStat<-ConnStat(output$raw$comm, num=250)
if(output$model$networkStat$taxcor$Var1==output$raw$networkStat$taxcor$Var1 & output$model$networkStat$taxcor$Var2==output$raw$networkStat$taxcor$Var2){
tab<-output$model$networkStat$taxcor
tab$value[tab$value==0]<-min(tab$value[tab$value>0])/10 # 1 orders of magnitude lower than lowest; but not zero!!
tab$value<-output$raw$networkStat$taxcor$value/tab$value
#tab$value[is.na(tab$value)]<-0 # not sure how to deal with this ... ?
output$raw$taxCor.Ratio<-tab}
# make expected value
s<-sample_sums(output$raw$comm)
s2<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(output$model$EV)))
s2<-for (i in 1:ncol(s2)) {s2[,i]<-s2[,i]*s[i]}
otu_table(output$model$EV)<-otu_table(output$model$EV, taxa_are_rows=TRUE)
M.Eval<-apply(X = otu_table(output$model$EV), MARGIN=1,FUN = function(x){mean(x[x>0])})
#output$model$SpeciesMeta$USI<-output$model$SpeciesMeta$
# create a tax table for whole dataset ...
tab<-data.frame(prevalence, mean_abundance, sd_abundance, M.Eval)
tab$names<-rownames(tab)
output$model$SpeciesMeta<-tab
output$model$R<-lm.test(output$model$comm)
sample_data(output$raw$comm)<-sample_data(output$model$comm)
output$model$PERMANOVA<-make.PERMANOVA(output$model$comm)
output$model$rarecurve<-ggrare(output$model$comm, 50, color="Factor")
print("metadata complete")
# implement each normalization function
for (i in 1:length(method)){
a<-get(method[i])
#name(a)<-i
b<-output$raw$comm
c<-a(b)
output[[method[i]]]$comm<-c
output[[method[i]]]$PERMANOVA<-make.PERMANOVA(c)
output[[method[i]]]$PERMANOVA$CategoryRratio<-output[[method[i]]]$PERMANOVA$Category$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$Category$aov.tab$R2
output[[method[i]]]$PERMANOVA$F1Rratio<-output[[method[i]]]$PERMANOVA$F1$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F1$aov.tab$R2
output[[method[i]]]$PERMANOVA$F2Rratio<-output[[method[i]]]$PERMANOVA$F2$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F2$aov.tab$R2
output[[method[i]]]$PERMANOVA$F3Rratio<-output[[method[i]]]$PERMANOVA$F3$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F3$aov.tab$R2
output[[method[i]]]$PERMANOVA$F4Rratio<-output[[method[i]]]$PERMANOVA$F4$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F4$aov.tab$R2
output[[method[i]]]$PERMANOVA$F5Rratio<-output[[method[i]]]$PERMANOVA$F5$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F5$aov.tab$R2
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$CategoryRratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F1Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F2Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F3Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F4Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F5Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
output[[method[i]]]$LII<-LII(output$model$comm, output[[method[i]]]$comm)
output[[method[i]]]$networkStat<-ConnStat(output[[method[i]]]$comm, num=250)
print(paste(method[i], " complete"))
}
# prepare raw metadata for lm analysis and model for lm analysis
output$raw$PERMANOVA<-make.PERMANOVA(output$raw$comm)
output$raw$PERMANOVA$CategoryRratio<-output[[method[i]]]$PERMANOVA$Category$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$Category$aov.tab$R2
output$raw$PERMANOVA$F1Rratio<-output$raw$PERMANOVA$F1$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F1$aov.tab$R2
output$raw$PERMANOVA$F2Rratio<-output$raw$PERMANOVA$F2$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F2$aov.tab$R2
output$raw$PERMANOVA$F3Rratio<-output$raw$PERMANOVA$F3$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F3$aov.tab$R2
output$raw$PERMANOVA$F4Rratio<-output$raw$PERMANOVA$F4$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F4$aov.tab$R2
output$raw$PERMANOVA$F5Rratio<-output$raw$PERMANOVA$F5$aov.tab$R2/output$model$PERMANOVA$F5$aov.tab$R2
names(output$raw$PERMANOVA$CategoryRratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output$raw$PERMANOVA$F1Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output$raw$PERMANOVA$F2Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output$raw$PERMANOVA$F3Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output$raw$PERMANOVA$F4Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output$raw$PERMANOVA$F5Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
print("raw permanova complete")
output$raw$LII<-LII(output$model$comm, output$raw$comm)
print("raw LII complete")
output$raw$lmtab<-lm.model(output$raw$comm)
output$raw$lmtab.model<-lm.model2(output$raw$comm)
print("lmtab raw complete")
output$model$lmtab<-lm.model(output$model$comm)
output$model$lmtab.model<-lm.model2(output$model$comm)# linear model of env. parameters as explanatory variables for abundance of each taxon
print("lmtab model complete")
output$raw$lmRatiotab<-output$raw$lmtab/output$model$lmtab #ratio of lm of env from normalized data to reference
output$raw$lmRatiotab.model<-output$raw$lmtab.model/output$model$lmtab.model #ratio of lm of env from normalized data to reference using only categorical model variables (no explicit env. model)
print("dtab complete")
# do 1- : calculates the information lost per taxon
for (i in 1:length(method)){
# make the species-wise LII value:
output$model$SpeciesMeta[[method[i]]]<-1-output[[method[i]]]$LII$R
# make the lm output for each normalization: (this is r-squared, could be r value ...)
output[[method[i]]]$lmtab<-lm.model(output[[method[i]]]$comm)# linear model of env. parameters as explanatory variables for abundance of each taxon
output[[method[i]]]$lmtab.model<-lm.model2(output[[method[i]]]$comm)
# conditional statement to make sure that the taxon names match, then:
# difference in rsquared values (or r values?) from reference:
if(names(output$model$lmtab)==names(output[[method[i]]]$lmtab)){
output[[method[i]]]$lmRatiotab<-output[[method[i]]]$lmtab/output$model$lmtab
output[[method[i]]]$lmRatiotab.model<-output[[method[i]]]$lmtab.model/output$model$lmtab.model
} #ratio of lm of env from normalized data to reference
else{print("Error in Dtab: names do not match")}
}
for (i in 1:length(method)){
if(output$model$networkStat$taxcor$Var1==output[[method[i]]]$networkStat$taxcor$Var1 & output$model$networkStat$taxcor$Var2==output[[method[i]]]$networkStat$taxcor$Var2){
tab<-output$model$networkStat$taxcor
tab$value[tab$value==0]<-min(tab$value[tab$value>0])/10 # 1 orders of magnitude lower than lowest; but not zero!!
tab$value<-output[[method[i]]]$networkStat$taxcor$value/tab$value
output[[method[i]]]$taxCor.Ratio<-tab
} #ratio of lm of env from normalized data to reference
else{print("Error in taxCor: names do not match")}
}
output
}
#' shell script for creating the simulation
#' @param reps number of replicate communities
#' @param commonN number of common species
#' @param groupN number of unique taxa to groups
#' @param singleN number of unique taxa to samples
#' @param D average sampling depth
#' @param V variation in sampling depth
#' @param method list of function names to be used in analysis
#' @param Spike whether or not to use the spike in functions. If spike==T, then any normalization function that does not include using the spike in, should filter the spikein before doing other normalization steps.
#' @param interact whether or not have taxa interact
#' @keywords benchmark
#' @export
#' @examples test.script<-benchmark.MM(reps=3, commonN=20, groupN=10, singleN=10, D=2000, V=1000)
#'benchmark.MM()
simulate.MM<-function(reps, commonN, groupN, singleN, D, V, method, Spike=T, Interact=T){
require(phyloseq)
array<-c(rep(commonN, reps))
names(array)<-c(paste0("rep", 1:reps, sep=""))
array<-sapply(array, run.analysis3, simplify=F, USE.NAMES = T, groupN, singleN, D, V, method, Spike, Interact)
array
}
#' workhorse function for simulate.MM
#' @param commonN number of common species
#' @param groupN number of unique taxa to groups
#' @param singleN number of unique taxa to samples
#' @param D average sampling depth
#' @param V variation in sampling depth
#' @param Spike whether or not to use the spike in functions. If spike==T, then any normalization function that does not include using the spike in, should filter the spikein before doing other normalization steps.
#' @param method list of function names to be applied as normalization
#' @param Interact logical should species interact
#' @param is.bias logical should seq bias be modeled? default is false
#' @keywords benchmark
#' @export
#' @examples
#' run.analysis3()
run.analysis3<-function(commonN, groupN, singleN, D, V, method, Spike, Interact, is.bias=F){
AllSpp<-c(paste0("spp", c(1:700), sep="")) # make a quick list of all species functions
AllSpp<-lapply(AllSpp, get) # connect function to name
AllSpp<-unlist(AllSpp) # format to be read by downstream functions
names(AllSpp)<-c(paste0("spp", c(1:700)))
if(Spike==TRUE){
spike<-c("spike1", "spike2", "spike3")
spike<-lapply(spike, get)
spike<-unlist(spike)
names(spike)<-c("spike1", "spike2", "spike3")
# Define list of 5 species w/ global distribution
global.spp<-c(names(spike), names(sample(AllSpp, commonN, replace=F)))
} else {
global.spp<-names(sample(AllSpp, commonN, replace=F))
}
# define list of species w/ regional distribution
group.spp<-NULL
group.spp$group1<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group2<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group3<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group4<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group5<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
group.spp$group6<-names(sample(AllSpp, groupN, replace=F))
# define list of species found at each site
rando.spp<-NULL
rando.spp$Site1<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site2<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site3<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site4<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site5<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group1), global.spp))
rando.spp$Site6<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site7<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site8<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site9<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site10<-unique(c(names(sample(AllSpp,singleN, replace=F)), c(group.spp$group2), global.spp))
rando.spp$Site11<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site12<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site13<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site14<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site15<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group3), global.spp))
rando.spp$Site16<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site17<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site18<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site19<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site20<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group4), global.spp))
rando.spp$Site21<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site22<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site23<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site24<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site25<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group5), global.spp))
rando.spp$Site26<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
rando.spp$Site27<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
rando.spp$Site28<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
rando.spp$Site29<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
rando.spp$Site30<-unique(c(names(sample(AllSpp, singleN, replace=F)), c(group.spp$group6), global.spp))
# make list of unique species arrays
library(reshape2)
f1c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f1c2<-c(1,3,10,30,60,15) # mean value of selections
f1c3<-c(0.5,1,4,10,20,5) # SD of selections
F1.frame<-mapply(rnorm, f1c1,f1c2,f1c3) # pick Factor 1 value for each site
F1<-reshape2::melt(F1.frame)
#F2
f2c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f2c2<-c(34,30,10,55,35,60) # mean value of selections
f2c3<-c(10,10,3,10,1,20) # SD of selections
F2.frame<-mapply(rnorm, f2c1,f2c2,f2c3) # pick Factor 2 value for each site
F2<-reshape2::melt(F2.frame)
#F3
f3c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f3c2<-c(1,3,10,15,3,15) # mean value of selections
f3c3<-c(0.5,1,3,3,1,5) # SD of selections
F3.frame<-mapply(rnorm, f3c1,f3c2,f3c3) # pick Factor 3 value for each site
F3<-reshape2::melt(F3.frame)
#F4
f4c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f4c2<-c(5,5,5,5,5,5) # mean value of selections
f4c3<-c(1,1,1,1,1,1) # SD of selections
F4.frame<-mapply(rnorm, f4c1,f4c2,f4c3) # pick Factor 4 value for each site
F4<-reshape2::melt(F4.frame)
#F5
f5c1<-c(5,5,5,5,5,5) # number of selections
f5c2<-c(50,50,50,50,50,50) # mean value of selections
f5c3<-c(20,20,20,20,20,20) # SD of selections
F5.frame<-mapply(rnorm, f5c1,f5c2,f5c3) # pick Factor 5 value for each site
F5<-reshape2::melt(F5.frame)
Factors<-data.frame(F1$value,F2$value,F3$value,F4$value,F5$value) # combine factors into data table
Sites<-c(paste0("Site", 1:30))
rownames(Factors)<-Sites
colnames(Factors)<-c("F1","F2","F3","F4","F5")
output<-list("reference"=NULL, "spplist"=NULL, "raw"=NULL)
output$spplist<-rando.spp
output$reference$comm<-make.refcomm(rando.spp, Factors) # output a phyloseq object... will make a list of phyloseq objects
output$reference$comm<-filter_taxa(output$reference$comm, function(x) sum(x)>0, TRUE)
if(Interact==T){
output$reference$GuildID<-make.guildtab(output$reference$comm)
output$reference$comm<-run.compete(output$reference$comm, output$reference$GuildID)
}
phy_tree(output$reference$comm)<-tree(output$reference$comm)
output$reference$EV<-transform_sample_counts(output$reference$comm, function(x) x / sum(x) )
output$metrics<-NULL
output$metrics$stats<-NULL
output$metrics$Richness<-NULL
Rich<-estimate_richness(output$reference$comm, measures="Observed")
output$metrics$Richness<-Rich
output$metrics$skewness<-median(apply(X = otu_table(output$reference$comm), MARGIN=2,FUN = function(x){skewness(x)}))
Seq.bias<-bias(output$reference$comm, is.bias) # creates vector of bias coefficients. Can be found below in species meta table
sample<-set.seqDepth(D,V)
output$raw$comm<-model.rarefy(output$reference$comm, sample, D, V) # simulating sequencing
print("spp selection complete")
sample_data(output$reference$comm)$Density<-sample_sums(output$reference$comm)# add sample sums
sample_data(output$reference$comm)$DensityF<-sample_sums(output$reference$comm)/mean(sample_sums(output$reference$comm))
sample_data(output$reference$comm)$Factor<-as.factor(c(rep("one",5),rep("two",5),rep("three",5),rep("four",5),rep("five",5),rep("six",5)))
sample_data(output$reference$comm)$Factor2<-as.factor(c(rep(1,5),rep(2,5),rep(3,5),rep(4,5),rep(5,5),rep(6,5)))
# remove taxa that have zero abundance in "raw" sequencing run
tax.filt<-filter_taxa(output$raw$comm, function(x)sum(x)>0)
output$metrics$tax.lost<-tax.filt
output$raw$comm<-filter_taxa(output$raw$comm, function(x)sum(x)>0, TRUE)
# remove taxa that are not kept from sequencing so that they don't penalize downstream methods
output$reference$comm<-prune_taxa(tax.filt, output$reference$comm)
output$reference$EV<-prune_taxa(tax.filt, output$reference$EV)
# for each species: measure prevalence
prevalence=apply(X = otu_table(output$reference$comm), MARGIN=1,FUN = function(x){sum(x > 0)})
# for each species: measure relative abundance (proportion of total counts?
p.abund<-transform_sample_counts(output$reference$comm, function(x) x/sum(x) )
mean_abundance<-apply(X = otu_table(p.abund), MARGIN=1,FUN = function(x){mean(x)})
sd_abundance<-apply(X = otu_table(p.abund), MARGIN=1,FUN = function(x){sd(x)})
# create a tax table for whole dataset ...
tab<-data.frame(prevalence, mean_abundance, sd_abundance, Seq.bias)
tab$names<-rownames(tab)
output$reference$SpeciesMeta<-tab
# make expected value
s<-sample_sums(output$raw$comm)
s2<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(output$reference$EV)))
s2<-for (i in 1:ncol(s2)) {s2[,i]<-s2[,i]*s[i]}
otu_table(output$reference$EV)<-otu_table(output$reference$EV, taxa_are_rows=TRUE)
M.Eval<-apply(X = otu_table(output$reference$EV), MARGIN=1,FUN = function(x){mean(x[x>0])})
# create a tax table for whole dataset ...
tab<-data.frame(prevalence, mean_abundance, sd_abundance, M.Eval)
tab$names<-rownames(tab)
output$reference$SpeciesMeta<-tab
output$reference$R<-lm.test(output$reference$comm)
sample_data(output$raw$comm)<-sample_data(output$reference$comm)
print("metadata complete")
# implement each normalization function
for (i in 1:length(method)){
a<-get(method[i])
#name(a)<-i
b<-output$raw$comm
c<-a(b)
output[[method[i]]]$comm<-c
}
output
}
#' Run LII
#' @param input output object from simulate.MM or run.analysis2
#' @param item list of items to run PERMANOVA on; must include c("reference", "raw", ... 'other methods')
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' run.LII()
run.LII<-function(input, item){
output<-input
for (i in 1:length(item)){
output[[item[i]]]$LII<-LII(output$reference$comm, output[[item[i]]]$comm)}
output
}
#' Run rarecurve
#' @param input output object from simulate.MM or run.analysis2
#' @param item list of items to run PERMANOVA on; must include c("reference", "raw", ... 'other methods')
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' run.rarecurve()
run.rarecurve<-function(input, item){
require(phyloseq)
output<-input
for (i in 1:length(item)){
output[[item[i]]]$rarecurve<-ggrare(output[[item[i]]]$comm, 50, color="Factor")}
output
}
#' Run Permanova, make PERMANVOA ratios
#' @param input output object from simulate.MM or run.analysis3
#' @param item list of items to run PERMANOVA on; must include c("reference", "raw", ... 'other methods')
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' run.PERMANOVA()
run.PERMANOVA<-function(input, item){
output<-input
for (i in 1:length(item)){
output[[item[i]]]$PERMANOVA<-make.PERMANOVA(item[i])}
for (i in 2:length(item)){
output[[item[i]]]$PERMANOVA$CategoryRratio<-output[[item[i]]]$PERMANOVA$Category$aov.tab$R2/output$reference$PERMANOVA$Category$aov.tab$R2
output[[item[i]]]$PERMANOVA$F1Rratio<-output[[item[i]]]$PERMANOVA$F1$aov.tab$R2/output$reference$PERMANOVA$F1$aov.tab$R2
output[[item[i]]]$PERMANOVA$F2Rratio<-output[[item[i]]]$PERMANOVA$F2$aov.tab$R2/output$reference$PERMANOVA$F2$aov.tab$R2
output[[item[i]]]$PERMANOVA$F3Rratio<-output[[item[i]]]$PERMANOVA$F3$aov.tab$R2/output$reference$PERMANOVA$F3$aov.tab$R2
output[[item[i]]]$PERMANOVA$F4Rratio<-output[[item[i]]]$PERMANOVA$F4$aov.tab$R2/output$reference$PERMANOVA$F4$aov.tab$R2
output[[item[i]]]$PERMANOVA$F5Rratio<-output[[item[i]]]$PERMANOVA$F5$aov.tab$R2/output$reference$PERMANOVA$F5$aov.tab$R2
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$CategoryRratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F1Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F2Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F3Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F4Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
names(output[[method[i]]]$PERMANOVA$F5Rratio)<-c("R ratio", "Residual ratio", "total")
}
output
}
#' extract and summarize PERMANOVA r-squared values
#' @param x output object from BENCHMARK.MM or run.analysis2
#' @param method list of methods applied
#' @param ... names of r ratios to extract. can be one of: "CategoryRratio", "F1Rratio", "F2Rratio","F3Rratio", "F4Rratio", "F5Rratio"
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' Summarize.PERMANOVA.Rratio()
Summarize.PERMANOVA.Rratio<-function(x, method, ...){
Ftab<-matrix(NA, nrow = length(x), ncol = length(method))
#print("reference")
for(i in 1:length(x)){
for(j in 1:length(method)){
Ftab[i,j]<-x[[i]][[method[j]]]$PERMANOVA[[...]][1]
}
}
rownames(Ftab)<-names(x)
colnames(Ftab)<-method
Ftab
}
#' create transformed community to relative abundance
#' @param ps phyloseq object input
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' RA()
RA<-function(ps){
s<-transform_sample_counts(ps, function(x) x / sum(x))
s
}
#' create transformed community to even rarefaction
#' @param ps phyloseq object input
#' @param level depth of rarefaction. NULL defaults to minimum value sample
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' eRare()
eRare<-function(ps, level=NULL){
if(is.null(level)){
out<-make.rarefy2(ps, min(sample_sums(ps)))}
else{
out<-make.rarefy2(ps, level)}
out
}
#' create transformed community to proportional rarefaction
#' @param ps phyloseq object input
#' @param level depth of rarefaction. NULL defaults to minimum value sample
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' pRare()
pRare<-function(ps, level=NULL){
if(is.null(level)){
out<-make.rarefy2(ps, min(sample_sums(ps))*sample_sums(ps)/mean(sample_sums(ps)))} else{out<-make.rarefy2(ps, level)}
out
}
#' create transformed community to Quantitative Sequencing value
#' @param ps phyloseq object input
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' QSeq()
QSeq<-function(ps){
scale<-sample_data(ps)$DensityF
out<-make.scaled2(ps, val=2*mean(sample_sums(ps)), scale)
out
}
#' create transformed community to deseqVST
#' @param ps phyloseq object input
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' deseqVST()
deseqVST<-function(ps){
out<-make.deseqVST(ps, "Factor", l=1)
out
}
#' create transformed community to limmaVST
#' @param ps phyloseq object input
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' limmaVST()
limmaVST<-function(ps){
out<-make.limmaVST(ps, "Factor")
out
}
#' produce linear model of each taxon against environmental variables
#' @param ps phyloseq object input
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' lm.model()
lm.model<-function(ps){
anova.otu<-t(as.data.frame(as.matrix(otu_table(ps))))
anova.env<-data.frame(as.matrix(sample_data(ps)))
anova.env$F1<-as.numeric(as.character(anova.env$F1))
anova.env$F2<-as.numeric(as.character(anova.env$F2))
anova.env$F3<-as.numeric(as.character(anova.env$F3))
anova.env$F4<-as.numeric(as.character(anova.env$F4))
anova.env$F5<-as.numeric(as.character(anova.env$F5))
testlm<-adply(anova.otu, 2, function(x) {
l1=summary(lm(x~anova.env$F1+anova.env$F2+anova.env$F3+anova.env$F4+anova.env$F5))
return(l1$r.squared)
})
testlm[is.na(testlm)]<-0
testlm2<-testlm$V1
names(testlm2)<-testlm$X1
#row.names(testlm)<-testlm$X1
#testlm<-testlm[,-1]
#testlm<-testlm[order(row.names(testlm)),]
testlm2
}
#' produce linear model of each taxon against experimental design
#' @param ps phyloseq object input
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' lm.model2()
lm.model2<-function(ps){
anova.otu<-t(as.data.frame(as.matrix(otu_table(ps))))
anova.env<-data.frame(as.matrix(sample_data(ps)))
testlm<-adply(anova.otu, 2, function(x) {
l1=summary(lm(x~anova.env$Factor2))
return(l1$r.squared)
})
testlm[is.na(testlm)]<-0
testlm2<-testlm$V1
names(testlm2)<-testlm$X1
#row.names(testlm)<-testlm$X1
#testlm<-testlm[,-1]
#testlm<-testlm[order(row.names(testlm)),]
testlm2
}
#' output sum of F values to a table from PERMANOVA across all simulations
#' @param trt output object from BENCHMARK.MM
#' @param method list of function names used in BENCHMARK.MM for community normalization
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' Summarize.Ftable()
Summarize.Ftable<-function(trt, method){
Ftab<-matrix(NA, nrow = length(trt), ncol = length(method))
for(i in 1:length(trt)){
for(j in 1:length(method)){
Ftab[i,j]<-sum(trt[[i]][[method[j]]]$PERMANOVA$aov.tab$F.Model, na.rm=T)
#print(sum(trt[[i]][j]$PERMANOVA$aov.tab$F.Model))
}
}
rownames(Ftab)<-names(trt)
colnames(Ftab)<-method
Ftab
}
#' Summarize the LII
#' @param trt output object from BENCHMARK.MM
#' @param method list of function names used in BENCHMARK.MM for community normalization
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' Summarize.LII()
Summarize.LII<-function(trt, method){
Ftab<-matrix(NA, nrow = length(trt), ncol = length(method))
for(i in 1:length(trt)){
for(j in 1:length(method)){
Ftab[i,j]<-sum(trt[[i]][[method[j]]]$LII$Index, na.rm=T)
#print(sum(trt[[i]][j]$PERMANOVA$aov.tab$F.Model))
}
}
rownames(Ftab)<-names(trt)
colnames(Ftab)<-method
Ftab
}
#' construct reference community
#' @param rando.spp list of species lists
#' @param Factors data frame of "environmental" data
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples depricated?
#' make.refcomm()
make.refcomm<-function(rando.spp, Factors){
l1<-NULL
for (i in 1:length(rando.spp[[1]])){
l1[i]<-do.call(rando.spp[[1]][i], list(Factors[1,1],Factors[1,2],Factors[1,3],Factors[1,4],Factors[1,5]))
}
#l1<-data.frame("Site1"=l1, "Spp"=rando.spp[[1]])
names(l1)<-rando.spp[[1]]
for (r in 2:nrow(Factors)) # for each site...
{ l2<-NULL
for (i in 1:length(rando.spp[[r]])){ # for each species in site...
l2[i]<-do.call(rando.spp[[r]][i], list(Factors[r,1],Factors[r,2],Factors[r,3],Factors[r,4],Factors[r,5]))
}
names(l2)<-rando.spp[[r]]
l1<-merge(as.data.frame(l1),as.data.frame(l2), by=0, all=T)
rownames(l1)<-l1$Row.names
colnames(l1)[colnames(l1) == "l1"] <- "Site1"
colnames(l1)[colnames(l1) == "l2"] <- paste("Site", r, sep="")
l1<-l1[,-1]
}
l1<-round(l1)
l1[mapply(is.infinite, l1)] <- NA
l1[is.na(l1)]<-0
l1[l1<0]<-0
otu<-otu_table(l1, taxa_are_rows = T)
Sa<-sample_data(Factors)
out<-phyloseq(otu, Sa)
out<-filter_taxa(out, function(x) sum(x)>0, T)
out
}
#' construct community
#' @param rando.spp list of species lists
#' @param Factors data frame of "environmental" data
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' make.comm2()
make.comm2<-function(rando.spp, Factors){
l1<-NULL
for (i in 1:length(rando.spp[[1]])){
l1[i]<-do.call(rando.spp[[1]][i], list(Factors[1,1],Factors[1,2],Factors[1,3],Factors[1,4],Factors[1,5]))
}
#l1<-data.frame("Site1"=l1, "Spp"=rando.spp[[1]])
names(l1)<-rando.spp[[1]]
for (r in 2:nrow(Factors)) # for each site...
{ l2<-NULL
for (i in 1:length(rando.spp[[r]])){ # for each species in site...
l2[i]<-do.call(rando.spp[[r]][i], list(Factors[r,1],Factors[r,2],Factors[r,3],Factors[r,4],Factors[r,5]))
}
names(l2)<-rando.spp[[r]]
l1<-merge(as.data.frame(l1),as.data.frame(l2), by=0, all=T)
rownames(l1)<-l1$Row.names
colnames(l1)[colnames(l1) == "l1"] <- "Site1"
colnames(l1)[colnames(l1) == "l2"] <- paste("Site", r, sep="")
l1<-l1[,-1]
}
l1<-round(l1)
l1[mapply(is.infinite, l1)] <- NA
l1[is.na(l1)]<-0
l1[l1<0]<-0
otu<-otu_table(l1, taxa_are_rows = T)
Sa<-sample_data(Factors)
out<-phyloseq(otu, Sa)
out
}
#' construct community (simple)
#' @param Comm1 list of species functions
#' @param Factors data frame of "environmental" data
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' make.comm()
make.comm<-function(Comm1, Factors){
otu<-matrix(data=NA, nrow=nrow(Factors), ncol = length(Comm1))
Sites<-c(paste0("Site", 1:30))
for(i in 1:length(Comm1)) {
for(row in 1:nrow(Factors)){
otu[row,i]<-do.call(Comm1[[i]], list(Factors[row,1],Factors[row,2],Factors[row,3],Factors[row,4],Factors[row,5]))
}
}
}
#' subsample community
#' @param comm1 phyloseq object
#' @param sample vector of arbitrary sampling depth set by set.seqDepth()
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' make.table()
make.table<-function(comm1, sample){
comm2<-comm1
otu<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(comm1)))
otu[]<-0
otu<-otu[order(rownames(otu)),]
otu_table(comm2)<-otu_table(otu, taxa_are_rows=TRUE)
comm<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(comm1)))
m<-as.data.frame(t(table(sample(rownames(comm), sample[1], replace=T, prob=comm[,1]/sum(comm[,1])))))
m<-m[,colnames(m)!="Var1"]
colnames(m)[colnames(m)=="Freq"]<-paste("Site", 1, sep="")
#print("step one")
m2<-as.data.frame(t(table(sample(rownames(comm),sample[2], replace=T, prob=comm[,2]/sum(comm[,2])))))
m<-merge(m, m2, by="Var2", all=T)
#print("step two")
m<-m[,colnames(m)!="Var1"]
colnames(m)[colnames(m)=="Freq"]<-paste("Site", 2, sep="")
for(i in 3:ncol(comm)){
a<-as.data.frame(t(table(sample(rownames(comm), sample[i], replace=T, prob=comm[,i]/sum(comm[,i])))))
a<-a[,colnames(a)!="Var1"]
m<-merge(m,a, by="Var2", all=T)
m<-m[,colnames(m)!="Var1"]
colnames(m)[colnames(m)=="Freq"]<-paste("Site", i, sep="")
}
rownames(m)<-m$Var2
m<-m[,-1]
m[is.na(m)]<-0
m<-m[order(rownames(m)),]
otu_table(comm1)<-otu_table(m, taxa_are_rows=T)
comm3<-merge_phyloseq(comm1, comm2)
m2<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(comm3)))
m2<-m2[order(rownames(m2)),]
print(rownames(m2))
print(rownames(otu))
if(!identical(colnames(m2),colnames(otu))){
stop("error: colnames do not match in rarefaction")
}
if(!identical(rownames(m2), rownames(otu))){
stop("error: rownames do not match in rarefaction")
}
otu_table(comm3)<-otu_table(m2, taxa_are_rows=T)
comm3
}
#' subsample community
#' @param comm1 phyloseq object
#' @param bias vector of bias values to adjust sequencing distribution
#' @param sample vector specifying sampling depth
#' @param b depth
#' @param v variation
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' model.rarefy()
model.rarefy<-function(comm1, bias, sample, b, c){
comm2<-run.bias(comm1, bias, is.bias)
if(any(sample_sums(comm2)>sample)){
while(any(sample_sums(comm2)<sample)){
sample<-set.seqDepth(b,c)
sample
}}
#print(sample)
a<-make.table(comm2, sample)
a
}
#' implement sequencing bias
#' @param ps phyloseq object
#' @param bias vector specifying taxon specific count bias
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' run.bias()
run.bias<-function(ps, bias){
require(phyloseq)
ps<-transform_sample_counts(ps, function(x) round(x*bias))
ps
}
#' implement sequencing bias
#' @param ps phyloseq object
#' @param bias vector specifying taxon specific count bias
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' bias()
bias<-function(ps, is.bias=F){
require(phyloseq)
if(is.bias==F){v<-rep(1,length(ntaxa(ps)))}
if(is.bias==T){v<-rnorm(length(ntaxa(ps)),1, 0.3)}
v
}
#' subsample community
#' @param x phyloseq object
#' @param level single value or vector specifying sampling depth
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' make.rarefy1()
make.rarefy1<-function(x, level){
require(phyloseq)
require(vegan)
sample_data(x)$adj<-level
if (length(level)==1){
p<-prune_samples(sample_sums(x)>level, x) # define samples we want to keep, discard rest
if (nsamples(x)>nsamples(p)){warning(as.character(nsamples(x)-nsamples(p)), " samples have been removed because they are lower than rarefaction limit")}
r<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(p)))
meta<-sample_data(p)
rr<-rrarefy2(t(r), meta$adj, replace=TRUE)
ps<-phyloseq(otu_table(t(rr), taxa_are_rows = T), sample_data(meta))
ps} else {
p<-prune_samples(sample_sums(x)>level, x)
if (nsamples(x)>nsamples(p)){warning(as.character(nsamples(x)-nsamples(p)), " samples have been removed because they are lower than rarefaction limit")}
r<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(p)))
meta<-sample_data(p)
rr<-rrarefy2(t(r), meta$adj, replace=T)
ps<-phyloseq(otu_table(t(rr), taxa_are_rows = T), sample_data(meta))
ps
}
}
#' subsample community
#' @param x phyloseq object
#' @param level single value or vector specifying sampling depth
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' make.rarefy2()
make.rarefy2<-function(x, level){
require(phyloseq)
require(vegan)
sample_data(x)$adj<-level
if (length(level)==1){
p<-prune_samples(sample_sums(x)>level, x) # define samples we want to keep, discard rest
if (nsamples(x)>nsamples(p)){warning(as.character(nsamples(x)-nsamples(p)), " samples have been removed because they are lower than rarefaction limit")}
r<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(p)))
meta<-sample_data(p)
rr<-rrarefy(t(r), meta$adj)
ps<-phyloseq(otu_table(t(rr), taxa_are_rows = T), sample_data(meta))
ps} else {
p<-prune_samples(sample_sums(x)>level, x)
if (nsamples(x)>nsamples(p)){warning(as.character(nsamples(x)-nsamples(p)), " samples have been removed because they are lower than rarefaction limit")}
r<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(p)))
meta<-sample_data(p)
rr<-rrarefy(t(r), meta$adj)
ps<-phyloseq(otu_table(t(rr), taxa_are_rows = T), sample_data(meta))
ps
}
}
#' normalize routine using scaling
#' @param ps phyloseq object with community to be normalized
#' @param val mean value for sample scaling
#' @param scale vector of sample relative abundances for scaling
#' @keywords reference community model microbiome
#' @export
#' @examples
#' make.scaled2()
make.scaled2<-function(ps, val, scale){
scaled<-data.frame(mapply(`*`, data.frame(as.matrix(otu_table(transform_sample_counts(ps, function(x) x/sum(x))))), scale * val))# sample_data(ps)$val))
names<-rownames(data.frame(as.matrix(otu_table(ps))))
rownames(scaled)<-names
scaled<-round(scaled)
p2<-ps
otu_table(p2)<- otu_table(scaled, taxa_are_rows=T)
p2
}
#' normalize routine using limma
#' @param ps phyloseq object with community to be normalized
#' @param Factor column from metadata for model matrix
#' @keywords limma variance stabilization
#' @export
#' @examples
#' make.limmaVST()
make.limmaVST<-function(ps, Factor){
require(phyloseq)
#ps<-filter_taxa(ps, function(x) sum(x)>0, T)
counts<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(ps)))
factors<-unlist(sample_data(ps)[,Factor])
design<-model.matrix(~factors)
dge <- DGEList(counts=counts)
dge <- calcNormFactors(dge) #what happens if we don't do this step?
v<-voom(dge, design, plot=F)
LimmaVST<-ps
otu_table(LimmaVST)<-otu_table(v$E, taxa_are_rows = T)
LimmaVST
}
#' normalize routine using deseq
#' @param ps phyloseq object with community to be normalized
#' @param Factor column from metadata for model matrix
#' @param l logical: 1 = log, other = linear
#' @keywords deseq variance stabilization
#' @export
#' @examples
#' make.deseqVST()
make.deseqVST<-function(ps, Factor, l=1){
r<-phyloseq_to_deseq2(ps, ~Factor)
geoMeans = apply(counts(r), 1, gm_mean)
dds = estimateSizeFactors(r, geoMeans = geoMeans)
#dds<-DESeqDataSetFromMatrix(r, sample_data(ps), design=~Factor)
#dds = estimateSizeFactors(dds)
if (l==1){dds = estimateDispersions(dds)} else {
dds <- estimateDispersionsGeneEst(dds)
dispersions(dds) <- mcols(dds)$dispGeneEst
}
vst = getVarianceStabilizedData(dds)
deseqVST<-ps
otu_table(deseqVST) <- otu_table(vst, taxa_are_rows = TRUE)
deseqVST
}
#' set "sequencing depth"
#' @param b mean seq depth
#' @param c variance of seq depth
#' @keywords deseq variance stabilization
#' @export
#' @examples
#' make.deseqVST()
set.seqDepth<-function(b, c){
d1<-rnorm(30, b, c)
d1[d1<0]<-0
d2<-rnorm(30, 100, 10)# because typically there is at least some low level number of counts
depth=d1+d2
depth<-round(depth)
depth
}
#' make guild and keyestone species table for the interaction functions;
#' @param ps phyloseq object
#' @keywords species interactions guilds groups
#' @export
#' @examples
#' make.guildtab()
make.guildtab<-function(ps){
require(phyloseq)
Tax<-taxa_names(ps)
Guild<-sample(c(1:6), length(Tax), replace=TRUE)
Keyestone<-sample(c(1, rep(0, 9)), length(Tax), replace=TRUE)
df<-data.frame(Tax, Guild, Keyestone)
rownames(df)<-df$Tax
df<-subset(df, df$Tax!="spike1"&df$Tax!="spike2"&df$Tax!="spike3")
df
}
#' run adjustment for species interactions / core function
#' @param ps otu table with taxa as rows
#' @param gtab table of taxa as rows + guilds + keyestone species
#' @keywords species interactions guilds groups
#' @export
#' @examples
#' compete()
compete<-function(otu, gtab){
require(phyloseq)
if(!identical(rownames(otu), rownames(gtab))){stop("taxa names do not match", setdiff(rownames(otu), rownames(gtab)))}
# make df of transformation vectors
newdf<-otu
for(i in 1:ncol(otu)){
if(length(gtab$Guild[otu[[i]]>0 & gtab$Keyestone>0])!=0){
dom<-getmode(gtab$Guild[otu[[i]]>0 & gtab$Keyestone>0])
newdf[[i]][gtab$Guild==dom]<-10
newdf[[i]][gtab$Guild!=dom]<-0.1
} else {
dom<-getmode(gtab$Guild[otu[[i]]>0])
newdf[[i]][gtab$Guild==dom]<-10
newdf[[i]][gtab$Guild!=dom]<-0.1
}
}
out<-otu*newdf # multiply dataframes
out<-round(out) # round out low values
# merge back into phyloseq object
# let's first test this functionality then work on merging back to phyloseq?
out
}
#' mode function
#' @param v vector to get mode from
#' @keywords species interactions guilds groups
#' @export
#' @examples
#' getmode()
getmode <- function(v) {
uniqv <- unique(v)
uniqv[which.max(tabulate(match(v, uniqv)))]
}
#' wrapper for running adjustment for species interactions / core function
#' @param ps phylosq object to pull the otu table from
#' @param gtab table of taxa as rows + guilds + keyestone species
#' @keywords species interactions guilds groups
#' @export
#' @examples
#' run.compete()
run.compete<-function(ps, gtab){
require(phyloseq)
ps2<-ps
ps2<-prune_taxa(taxa_names(ps2)!="spike1"&taxa_names(ps2)!="spike2"&taxa_names(ps2)!="spike3",ps)
otu<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(ps2)))
otu<-compete(otu, gtab)
otu_table(ps2)<-otu_table(otu, taxa_are_rows = T)
ps3<-prune_taxa(taxa_names(ps)=="spike1"|taxa_names(ps)=="spike2"|taxa_names(ps)=="spike3",ps)
out<-merge_phyloseq(ps2, ps3)
out # test this!!
}
#' geometric mean function for deseq functions
#' @param x data table of community values
#' @keywords geometric mean
#' @export
#' @examples
#' gm_mean()
gm_mean <- function(x, na.rm=TRUE){
exp(sum(log(x[x > 0]), na.rm=na.rm) / length(x))
}
#' standardizes the taxon abundance by taking counts relative to mean abundance of that taxon
#' @param ps phyloseq object with community to be normalized
#' @param ref reference community to ensure even lost taxa are included
#' @param method logical: 1 applies a exp() correction for log-transformed sample counts
#' @keywords relative abundance taxa
#' @export
#' @examples
#' Delta.sppcount()
Delta.sppcount<-function(ps,ref, method=0){
tab<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(ref)))
tab[]<-0
env<-sample_data(ref)
tab<-phyloseq(otu_table(tab, taxa_are_rows = TRUE), sample_data(env))
#make phyloseq object, subset phyloseq then merge second phyloseq.
#merge_phyloseq()
out<-as.data.frame(t(as.matrix(otu_table(ps))))
out1<-as.data.frame(t(as.matrix(otu_table(ps))))
if(method==1){
out<-exp(out)
out<-sapply(seq.int(dim(out)[2]), function(i) out[,i]/mean(out[,i]))
out[is.nan(out)]<-0
rownames(out)<-rownames(out1)
colnames(out)<-colnames(out1)
ps<-otu_table(out, taxa_are_rows = F)
ps<-merge_phyloseq(ps, tab)
ps
} else {
out<-sapply(seq.int(dim(out)[2]), function(i) out[,i]/mean(out[,i]))
out[is.nan(out)]<-0
rownames(out)<-rownames(out1)
colnames(out)<-colnames(out1)
ps<-otu_table(out, taxa_are_rows = F)
ps<-merge_phyloseq(ps, tab)
ps
}
}
#' conducts a PERMANOVA specific for this model
#' @param ps phyloseq object
#' @keywords deseq variance stabilization
#' @export
#' @examples
#' make.PERMANOVA()
make.PERMANOVA<-function(ps){
require(vegan)
require(phyloseq)
otu<-as.matrix(otu_table(ps))
otu[otu<0]<-0
otu_table(ps)<-otu_table(otu, taxa_are_rows=T)
ps<-filter_taxa(ps, function(x) sum(x)>0, T)
x<-as.data.frame(t(as.matrix(otu_table(ps))))
y<-data.frame(as.matrix(sample_data(ps)))
y$F1<-as.numeric(as.character(y$F1))
y$F2<-as.numeric(as.character(y$F2))
y$F3<-as.numeric(as.character(y$F3))
y$F4<-as.numeric(as.character(y$F4))
y$F5<-as.numeric(as.character(y$F5))
data.frame(x,y)
Category<-adonis(x~Factor2, data=y)
F1<-adonis(x~F1, data=y)
F2<-adonis(x~F2, data=y)
F3<-adonis(x~F3, data=y)
F4<-adonis(x~F4, data=y)
F5<-adonis(x~F5, data=y)
out<-NULL
out$Category<-Category
out$F1<-F1
out$F2<-F2
out$F3<-F3
out$F4<-F4
out$F5<-F5
out
}
#' extract PERMANOVA r2 values from a benchmarked object
#' @param tst product object from benchmark.MM()
#' @keywords PERMANOVA extract r squared
#' @export
#' @examples
#' ext.PERMANOVA()
ext.PERMANOVA<-function(tst){
out<-list("raw"=c(rep(NA, length(tst))),"RA"=c(rep(NA, length(tst))), "scaled"=c(rep(NA, length(tst))), "pRare"=c(rep(NA, length(tst))), "eRare"=c(rep(NA, length(tst))), "deseqVST"=c(rep(NA, length(tst))),"deseqVST_scaled"=c(rep(NA, length(tst))), "limmaVST"=c(rep(NA, length(tst))))
for(i in 1:length(tst)) {out$raw[i]<-tst[[i]]$raw$PERMANOVA$aov.tab$R2[7]}
for(i in 1:length(tst)) {out$RA[i]<-tst[[i]]$RA$PERMANOVA$aov.tab$R2[7]}
for(i in 1:length(tst)) {out$scaled[i]<-tst[[i]]$scaled$PERMANOVA$aov.tab$R2[7]}
for(i in 1:length(tst)) {out$pRare[i]<-tst[[i]]$pRare$PERMANOVA$aov.tab$R2[7]}
for(i in 1:length(tst)) {out$eRare[i]<-tst[[i]]$eRare$PERMANOVA$aov.tab$R2[7]}
for(i in 1:length(tst)) {out$deseqVST[i]<-tst[[i]]$deseqVST$PERMANOVA$aov.tab$R2[7]}
for(i in 1:length(tst)) {out$deseqVST_scaled[i]<-tst[[i]]$deseqVST_scaled$PERMANOVA$aov.tab$R2[7]}
for(i in 1:length(tst)) {out$limmaVST[i]<-tst[[i]]$limma$PERMANOVA$aov.tab$R2[7]}
out1<-as.data.frame(out)
out1
#out2<-boxplot(out1)
#out4<-c("table"=out1,"plot"=out2)
#out4
}
#' extract Lost Information Index values from a benchmarked object
#' @param ps1.R reference phyloseq object
#' @param ps2.T phyloseq object with normalized community
#' @keywords LII lost information index extract r squared
#' @export
#' @examples
#' LII()
LII <-function(ps1.R, ps2.T){
out<-NULL
reference<-as.matrix(as.data.frame(t(as.matrix(otu_table(Delta.sppcount(ps1.R, ps1.R, method=0))))))
reference<-reference[order(rownames(reference)),]
#reference2<-as.matrix(as.data.frame(t(as.matrix(otu_table(Delta.sppcount(ps1.R, ps1.R, method=0))))))
#reference2<-reference2[order(rownames(reference2)),]
treatment<-as.matrix(as.data.frame(t(as.matrix(otu_table(Delta.sppcount(ps2.T, ps1.R, method=0))))))
treatment<-treatment[order(rownames(treatment)),]
if(identical(rownames(reference), rownames(treatment))){
Ci<-sapply(seq.int(dim(reference)[1]), function(i) summary(lm(reference[i,] ~ treatment[i,]))$r.squared)
#Ci2<-sapply(seq.int(dim(reference)[1]), function(i) summary(lm(reference[i,] ~ reference2[i,]))$r.squared)
out$Index<-sum(1-abs(Ci))/ntaxa(ps1.R)
out$R<-Ci
out$diff<-1-Ci
names(out$R)<-rownames(reference)
names(out$diff)<-rownames(reference)
out} else {print("species do not match")}
}
#' extract Lost Information Index values from a benchmarked object
#' @param tst product object from benchmark.MM()
#' @keywords LII lost information index extract r squared
#' @export
#' @examples
#' ext.LII()
ext.LII<-function(tst){
out<-list("raw"=c(rep(NA, length(tst))), "RA"=c(rep(NA, length(tst))),"scaled"=c(rep(NA, length(tst))), "pRare"=c(rep(NA, length(tst))), "eRare"=c(rep(NA, length(tst))), "deseqVST"=c(rep(NA, length(tst))),"deseqVST_scaled"=c(rep(NA, length(tst))), "limmaVST"=c(rep(NA, length(tst))))
for(i in 1:length(tst)) {out$raw[i]<-tst[[i]]$raw$LII$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$RA[i]<-tst[[i]]$RA$LII$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$scaled[i]<-tst[[i]]$scaled$LII$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$pRare[i]<-tst[[i]]$pRare$LII$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$eRare[i]<-tst[[i]]$eRare$LII$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$deseqVST[i]<-tst[[i]]$deseqVST$LII$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$deseqVST_scaled[i]<-tst[[i]]$deseqVST_scaled$LII$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$limmaVST[i]<-tst[[i]]$limma$LII$Index}
out1<-as.data.frame(out)
out1
}
#' make a random tree object for simulation
#' @param ps phyloseq object
#' @keywords LII lost information index extract r squared
#' @export
#' @examples
#' tree()
tree<-function(ps){
require(ape)
names<-taxa_names(ps)
tree<-rtree(n=length(names)) # need to figure out how to model env based on phylogeny
tree$tip.label<-names
tree
}
#' generate network analysis and network stats
#' @param ps phyloseq object
#' @param num number of edges for static analysis
#' @keywords LII lost information index extract r squared
#' @export
#' @examples
#' ConnStat()
ConnStat<-function(ps, num=250){
require(phyloseq)
require(igraph)
out<-NULL
o<-otu_table(ps)
c<-cor(o)
i=1
c[c<1]<-0
n<-graph_from_incidence_matrix(c)
while(ecount(n)<num){
t<-otu_table(ps)
t<-cor(t)
t[t<i]<-0
t[t>i]<-1
n<-graph_from_incidence_matrix(t)
i=i-0.001
}
cfg<-cluster_fast_greedy(as.undirected(n))
out$Dynamic<-NULL
out$Dynamic$cfg<-cfg
out$Dynamic$n<-n
#plot(cfg, as.undirected(n), layout=layout_nicely(n), vertex.label=NA, main="Dynamic", vertex.size=10)
table<-matrix(nrow=2,ncol=4)
colnames(table)<-c("Mean_Closeness", "Mean_Degree", "Modularity", "Threshold")
rownames(table)<-c("Dynamic", "Static")
table[1,1]<-mean(closeness(n))
table[1,2]<-mean(degree(n))
table[1,3]<-modularity(n, membership(cfg))
table[1,4]<-i
t<-otu_table(ps)
t<-cor(t)
t[t<0.8]<-0
t[t>0.8]<-1
n<-graph_from_incidence_matrix(t)
cfg<-cluster_fast_greedy(as.undirected(n))
table[2,1]<-mean(closeness(n))
table[2,2]<-mean(degree(n))
table[2,3]<-modularity(n, membership(cfg))
table[2,4]<-0.8
#plot(cfg, as.undirected(n), layout=layout_nicely(n), vertex.label=NA, main="Static", vertex.size=10)
out$stats<-table
out$Static<-NULL
out$Static$cfg<-cfg
out$Static$n<-n
out$taxcor<-melt(cor(t(as.data.frame(as.matrix(otu_table(ps))))))
out$taxcor$value[is.na(out$taxcor$value)]<-0
out
}
#' get network plot from networks that have been generated by BENCHMARK.MM
#' @param x output object from BENCHMARK.MM
#' @param method names of normalization functions as characters. Must be consistent with inputs to BENCHMARK.MM
#' @keywords network statistics analysis plot
#' @export
#' @examples
#' getNetPlot()
getNetPlot<-function(x, method){
for(i in 1:length(x)){
for(j in 1:length(method)){
plot(x[[i]][[method[j]]]$networkStat$Dynamic$cfg, as.undirected(x[[i]][[method[j]]]$networkStat$Dynamic$n), layout=layout_nicely(x[[i]][[method[j]]]$networkStat$Dynamic$n),
vertex.label=NA, main=paste("Dynamic", method[j]), vertex.size=10)
plot(x[[i]][[method[j]]]$networkStat$Static$cfg, as.undirected(x[[i]][[method[j]]]$networkStat$Static$n), layout=layout_nicely(x[[i]][[method[j]]]$networkStat$Static$n),
vertex.label=NA, main=paste("Static", method[j]), vertex.size=10)
}
}
}
#' get network stats from networks that have been generated by BENCHMARK.MM
#' @param x output object from BENCHMARK.MM
#' @param method names of normalization functions as characters. Must be consistent with inputs to BENCHMARK.MM
#' @keywords network statistics analysis plot
#' @export
#' @examples
#' getNetStats()
getNetStats<-function(x, method){
print(length(method))
D.module.table<-matrix(nrow=length(x), ncol=length(method))
D.Threshold.table<-matrix(nrow=length(x), ncol=length(method))
S.module.table<-matrix(nrow=length(x), ncol=length(method))
S.Threshold.table<-matrix(nrow=length(x), ncol=length(method))
for(i in 1:length(x)){
for(j in 1:length(method)){
print(x[[i]][[method[j]]]$networkStat$stats[1,3])
D.module.table[i,j]<-x[[i]][[method[j]]]$networkStat$stats[1,3]
D.Threshold.table[i,j]<-x[[i]][[method[j]]]$networkStat$stats[1,4]
S.module.table[i,j]<-x[[i]][[method[j]]]$networkStat$stats[2,3]
S.Threshold.table[i,j]<-x[[i]][[method[j]]]$networkStat$stats[2,4]
}
}
rownames(D.module.table)<-paste("rep", 1:length(x))
rownames(D.Threshold.table)<-paste("rep", 1:length(x))
rownames(S.module.table)<-paste("rep", 1:length(x))
rownames(S.Threshold.table)<-paste("rep", 1:length(x))
colnames(D.module.table)<-method
colnames(D.Threshold.table)<-method
colnames(S.module.table)<-method
colnames(S.Threshold.table)<-method
out<-NULL
out$D.module.table<-D.module.table
out$D.Threshold.table<-D.Threshold.table
out$S.module.table<-S.module.table
out$S.Threshold.table<-S.Threshold.table
out
}
#' Summarize output from lm ratio index for median (environment)
#' @param x output object from BENCHMARK.MM
#' @param method names of normalization functions as characters. Must be consistent with inputs to BENCHMARK.MM
#' @keywords network statistics analysis plot
#' @export
#' @examples
#' Summarize.lmRatiotabModel.Mean()
Summarize.lmRatiotabModel.Mean<-function(x, method){
Ftab<-matrix(NA, nrow = length(x), ncol = length(method)) # make matrix
for(i in 1:length(x)){
for(j in 1:length(method)){
Ftab[i,j]<-mean(x[[i]][[method[j]]]$lmRatiotab.model, na.rm=T)
#print(sum(trt[[i]][j]$PERMANOVA$aov.tab$F.Model))
}
}
rownames(Ftab)<-names(x)
colnames(Ftab)<-method
Ftab
}
#' Summarize output from lm ratio index for variance (environment)
#' @param x output object from BENCHMARK.MM
#' @param method names of normalization functions as characters. Must be consistent with inputs to BENCHMARK.MM
#' @keywords network statistics analysis plot
#' @export
#' @examples
#' Summarize.lmRatiotabModel.Var()
Summarize.lmRatiotabModel.Var<-function(x, method){
Ftab<-matrix(NA, nrow = length(x), ncol = length(method)) # make matrix
for(i in 1:length(x)){
for(j in 1:length(method)){
Ftab[i,j]<-var(x[[i]][[method[j]]]$lmRatiotab.model, na.rm=T)
#print(sum(trt[[i]][j]$PERMANOVA$aov.tab$F.Model))
}
}
rownames(Ftab)<-names(x)
colnames(Ftab)<-method
Ftab
}
#' Summarize output from lm ratio index for median (categorical)
#' @param x output object from BENCHMARK.MM
#' @param method names of normalization functions as characters. Must be consistent with inputs to BENCHMARK.MM
#' @keywords network statistics analysis plot
#' @export
#' @examples
#' Summarize.lmRatiotabModel.Mean()
Summarize.lmRatiotab.Mean<-function(x, method){
Ftab<-matrix(NA, nrow = length(x), ncol = length(method)) # make matrix
for(i in 1:length(x)){
for(j in 1:length(method)){
Ftab[i,j]<-mean(x[[i]][[method[j]]]$lmRatiotab, na.rm=T)
#print(sum(trt[[i]][j]$PERMANOVA$aov.tab$F.Model))
}
}
rownames(Ftab)<-names(x)
colnames(Ftab)<-method
Ftab
}
#' extract output from taxa correlation ratio in a table form
#' @param x output object from BENCHMARK.MM
#' @param method names of normalization functions as characters. Must be consistent with inputs to BENCHMARK.MM
#' @keywords network statistics analysis plot
#' @export
#' @examples
#' getTaxCor.Tab()
getTaxCor.Tab<-function(x, method){
V.tax<-matrix(nrow=length(x), ncol=length(method))
Median.tax<-matrix(nrow=length(x), ncol=length(method))
for(i in 1:length(x)){
for(j in 1:length(method)){
v<-x[[i]][[method[j]]]$taxCor.Ratio$value
V.tax[i,j]<-var(v)
Median.tax[i,j]<-mean(v)
}
}
rownames(V.tax)<-paste("rep", 1:length(x))
rownames(Median.tax)<-paste("rep", 1:length(x))
colnames(V.tax)<-method
colnames(Median.tax)<-method
out<-NULL
out$V.tax<-V.tax
out$Median.tax<-Median.tax
out
}
#' Summarize output from lm ratio index for variance (categorical)
#' @param x output object from BENCHMARK.MM
#' @param method names of normalization functions as characters. Must be consistent with inputs to BENCHMARK.MM
#' @keywords network statistics analysis plot
#' @export
#' @examples
#' Summarize.lmRatiotabModel.Median()
Summarize.lmRatiotab.Var<-function(x, method){
Ftab<-matrix(NA, nrow = length(x), ncol = length(method)) # make matrix
for(i in 1:length(x)){
for(j in 1:length(method)){
Ftab[i,j]<-var(trt[[i]][[method[j]]]$lmRatiotab, na.rm=T)
#print(sum(trt[[i]][j]$PERMANOVA$aov.tab$F.Model))
}
}
rownames(Ftab)<-names(x)
colnames(Ftab)<-method
Ftab
}
#' extract correlation values between LII and DMI
#' @param tst product object from benchmark.MM()
#' @keywords LII DMI lost information index extract r squared
#' @export
#' @examples
#' ext.RI()
ext.RI<-function(tst){
out<-list("raw"=c(rep(NA, length(tst))), "RA"=c(rep(NA, length(tst))),"scaled"=c(rep(NA, length(tst))), "pRare"=c(rep(NA, length(tst))), "eRare"=c(rep(NA, length(tst))), "deseqVST"=c(rep(NA, length(tst))),"deseqVST_scaled"=c(rep(NA, length(tst))), "limmaVST"=c(rep(NA, length(tst))))
for(i in 1:length(tst)) {out$raw[i]<-tst[[i]]$metrics$stats$rawVA$r.squared}
for(i in 1:length(tst)) {out$RA[i]<-tst[[i]]$metrics$stats$RADVA$r.squared}
for(i in 1:length(tst)) {out$scaled[i]<-tst[[i]]$metrics$stats$scaleVA$r.squared}
for(i in 1:length(tst)) {out$pRare[i]<-tst[[i]]$metrics$stats$pRareVA$r.squared}
for(i in 1:length(tst)) {out$eRare[i]<-tst[[i]]$metrics$stats$eRareVA$r.squared}
for(i in 1:length(tst)) {out$deseqVST[i]<-tst[[i]]$metrics$stats$deseqVA$r.squared}
for(i in 1:length(tst)) {out$deseqVST_scaled[i]<-tst[[i]]$metrics$stats$deseqSC.VA$r.squared}
for(i in 1:length(tst)) {out$limmaVST[i]<-tst[[i]]$metrics$stats$limmaVA$r.squared}
out1<-as.data.frame(out)
out1
}
#' extract Overmodeling Index values from a benchmarked object
#' @param tst product object from benchmark.MM()
#' @keywords LII lost information index extract r squared
#' @export
#' @examples
#' ext.LII()
ext.DMI<-function(tst){
out<-list("raw"=c(rep(NA, length(tst))), "RA"=c(rep(NA, length(tst))),"scaled"=c(rep(NA, length(tst))), "pRare"=c(rep(NA, length(tst))), "eRare"=c(rep(NA, length(tst))), "deseqVST"=c(rep(NA, length(tst))),"deseqVST_scaled"=c(rep(NA, length(tst))), "limmaVST"=c(rep(NA, length(tst))))
for(i in 1:length(tst)) {out$raw[i]<-tst[[i]]$raw$DMI$Index$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$RA[i]<-tst[[i]]$RA$DMI$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$scaled[i]<-tst[[i]]$scaled$DMI$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$pRare[i]<-tst[[i]]$pRare$DMI$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$eRare[i]<-tst[[i]]$eRare$DMI$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$deseqVST[i]<-tst[[i]]$deseqVST$DMI$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$deseqVST_scaled[i]<-tst[[i]]$deseqVST_scaled$DMI$Index}
for(i in 1:length(tst)) {out$limmaVST[i]<-tst[[i]]$limma$DMI$Index}
out1<-as.data.frame(out)
out1
}
#' test difference of linear model r2 values
#' @param ps1 product object from benchmark.MM()
#' @param ps2 product object from benchmark.MM()
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' SVI()
SVI<-function(ps1, ps2){
reference<-lm.test(ps1)
reference<-reference[order(names(reference))]
trt<-lm.test(ps2)
trt<-trt[order(names(trt))]
if(identical(names(reference),names(trt))){
o<-reference$lm-trt$lm
o} else {print("SVI names not identical")}
}
#' Delta Model index (DMI)
#' @param ps1 product object from benchmark.MM()
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' DMI()
DMI<-function(ps1, ps2){
o<-NULL
o$SVI<-SVI(ps1,ps2)
o$Index<-sum(abs(o$SVI[o$SVI<0]))
o$R<-lm.test(ps2)
o
}
#' make linear model for each taxon
#' @param ps product object from benchmark.MM()
#' @keywords LII lost information index extract r squared
#' @export
#' @examples
#' lm.test()
lm.test<-function(ps){
anova.otu<-as.data.frame(t(as.matrix(otu_table(ps))))
anova.env<-data.frame(as.matrix(sample_data(ps)))
anova.env$F1<-as.numeric(as.character(anova.env$F1))
anova.env$F2<-as.numeric(as.character(anova.env$F2))
anova.env$F3<-as.numeric(as.character(anova.env$F3))
anova.env$F4<-as.numeric(as.character(anova.env$F4))
anova.env$F5<-as.numeric(as.character(anova.env$F5))
testlm<-apply(anova.otu, 2, function(x) {
#l1=summary(lm(x~anova.env$Factor+anova.env$F1+anova.env$F2+anova.env$F3+anova.env$F4+anova.env$F5))
l1=summary(lm(x~anova.env$F1+anova.env$F2+anova.env$F3+anova.env$F4+anova.env$F5))
return(l1$r.squared)
})
testlm[is.na(testlm)]<-0
testlm<-testlm[order(names(testlm))]
lost<-length(testlm[testlm==0])
out<-list("lm"=testlm, "lost"=lost)
out
}
#' test difference of linear model r2 values
#' @param ps1.R phyloseq object of reference community
#' @param ps2.T phyloseq object of community to be tested
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' SVI2()
SVI2 <-function(ps1.R, ps2.T){
reference<-as.matrix(as.data.frame(t(as.matrix(otu_table(Delta.sppcount(ps1.R, ps1.R, method=0))))))
treatment<-as.matrix(as.data.frame(t(as.matrix(otu_table(Delta.sppcount(ps2.T, ps1.R, method=0))))))
Ci<-sapply(seq.int(dim(reference)[1]), function(i) sum(abs(reference[i,] - treatment[i,])))
names(Ci)<-rownames(reference)
Ci
}
#' Calculate diversity and skew metrics
#' @param ps1.T phyloseq object of community
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' div()
div <-function(ps2.T){
require(phyloseq)
require(vegan)
require(asbio)
out<-NULL
tab<-as.matrix(otu_table(ps2.T))
out$shannon<-diversity(tab, index="shannon")
out$simpson<-diversity(tab, index="simpson")
#out$evenness<-evenness(tab)
#out$skew<-lapply(tab, skewness)
out
}
#' make indicators from deseq
#' @param ps product object from benchmark.MM()
#' @keywords deseq indicator species
#' @export
#' @examples
#' deseqIndics()
deseqIndics<-function(ps){
require(phyloseq)
require(DESeq2)
r1<-subset_samples(ps, Factor=="one"|Factor=="two")
r2<-subset_samples(ps, Factor=="one"|Factor=="three")
r3<-subset_samples(ps, Factor=="one"|Factor=="four")
r4<-subset_samples(ps, Factor=="one"|Factor=="five")
r5<-subset_samples(ps, Factor=="one"|Factor=="six")
tab<-ldply(list(r1,r2,r3,r4,r5), deseq.res)
tab<-t(tab)
tab[tab > 0.05]<-NA
tab[tab < 0.05]<-1
tab[is.na(tab)]<-0
#tab[tab > 0.05]<-0
colnames(tab)<-c("OneVTwo", "OneVThree", "OneVFour", "OneVFive", "OneVSix")
tab
}
#' p values of deseq indicator species
#' @param x phyloseq object
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' deseq.res()
deseq.res<-function(x){
sample_data(x)$Factor <- relevel(sample_data(x)$Factor, "one")
r<-phyloseq_to_deseq2(x, ~Factor)
geoMeans = apply(counts(r), 1, gm_mean)
dds = estimateSizeFactors(r, geoMeans = geoMeans)
dds<-DESeq(dds)
res <- results(dds)
res.p<-res$padj
names(res.p)<-res@rownames
res.p}
#' make indicator species
#' @param ps phyloseq object with community to be tested
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' indicspp()
indicspp<-function(ps){
require(phyloseq)
require(indicspecies)
#ps<-filter_taxa(ps, function(x) sum(x)>0, T)
p<-as.data.frame(as.matrix(t(otu_table(ps))))
e<-sample_data(ps)$Factor
m<-multipatt(p, e, control=how(nperm=999), duleg=TRUE)
m.s<-m$sign
m.s[is.na(m.s$p.value), 9]<-1.000
m.s[m.s$p.value>0.05,1:6]<-0
m.s[is.na(m.s)]<-0
m.s
}
#' extract summary from indicspp()
#' @param ps phyloseq
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' indicsummary()
indicsummary<-function(ps){
require(phyloseq)
require(indicspecies)
#ps<-filter_taxa(ps, function(x) sum(x)>0, T)
p<-as.data.frame(as.matrix(t(otu_table(ps))))
e<-sample_data(ps)$Factor
m<-multipatt(p, e, control=how(nperm=999))
summary(m)
}
#' make limma indicators
#' @param ps1 product object from benchmark.MM()
#' @param Factor product object from benchmark.MM()
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' limma.Indics3()
limma.Indics3<-function(ps, Factor){
ps<-filter_taxa(ps, function(x) sum(x)>0, T)
counts<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(ps)))
factors<-sample_data(ps)$Factor
factors<-factor(factors, levels(factors)[c(3,6,5,2,1,4)])
design<-model.matrix(~0+factors)
contr.matrix<- makeContrasts(
TwoVOne = factorstwo-factorsone,
ThreeVOne = factorsthree-factorsone,
FourVOne = factorsfour-factorsone,
FiveVOne = factorsfive-factorsone,
SixVOne = factorssix-factorsone,
levels = colnames(design))
dge <- DGEList(counts=counts)
dge <- calcNormFactors(dge) #what happens if we don't do this step?
v<-voom(dge, design, plot=F)
fitV <- lmFit(v, design)
fitV <- contrasts.fit(fitV, contrasts=contr.matrix)
fitV <- eBayes(fitV, trend=TRUE)
sig<-decideTests(fitV)
sig
}
#' make limma indicators
#' @param ps1 product object from benchmark.MM()
#' @param Factor product object from benchmark.MM()
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' limma.Indics()
limma.Indics<-function(ps, Factor){
counts<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(ps)))
factors<-sample_data(ps)$Factor
factors<-factor(factors, levels(factors)[c(6,12,10,4,3,8,7,1,5,9,2,11)])
design<-model.matrix(~0+factors)
contr.matrix<- makeContrasts(
TwoVOne = factorstwo-factorsone,
ThreeVOne = factorsthree-factorsone,
FourVOne = factorsfour-factorsone,
FiveVOne = factorsfive-factorsone,
SixVOne = factorssix-factorsone,
SevenVOne = factorsseven-factorsone,
EightVOne = factorseight-factorsone,
NineVOne = factorsnine-factorsone,
TenVOne = factorsten-factorsone,
ElevenVOne = factorseleven-factorsone,
TwelveVOne = factorstwelve-factorsone,
levels = colnames(design))
dge <- DGEList(counts=counts)
dge <- calcNormFactors(dge) #what happens if we don't do this step?
v<-voom(dge, design, plot=F)
fitV <- lmFit(v, design)
fitV <- contrasts.fit(fitV, contrasts=contr.matrix)
fitV <- eBayes(fitV, trend=TRUE)
sig<-decideTests(fitV)
sig
}
#' do filter protocol for limma
#' @param ps product object from benchmark.MM()
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' filter.limma()
filter.limma<-function(ps){
x<-as.data.frame(as.matrix(otu_table(ps)))
group=sample_data(ps)$Factor2
keep.exprs <- filterByExpr(x, group=group)
x <- x[keep.exprs,, keep.lib.sizes=FALSE]
otu_table(ps)<-otu_table(x, taxa_are_rows = TRUE)
ps
}
#' do filter protocol for limma
#' @param comm product object from benchmark.MM()
#' @param r product object from benchmark.MM()
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' make.table2()
make.table2<-function(comm, r){
m<-as.data.frame(t(table(sample(rownames(comm),rnorm(1, 250, 75), replace=T, prob=comm[,1]/sum(comm[,1])))))
m<-m[,colnames(m)!="Var1"]
colnames(m)[colnames(m)=="Freq"]<-paste("site", 1, r, sep=".")
m2<-as.data.frame(t(table(sample(rownames(comm),rnorm(1, 250, 75), replace=T, prob=comm[,2]/sum(comm[,2])))))
m<-merge(m, m2, by="Var2", all=T)
m<-m[,colnames(m)!="Var1"]
colnames(m)[colnames(m)=="Freq"]<-paste("site", 2, r, sep=".")
for(i in 3:ncol(comm)){
a<-as.data.frame(t(table(sample(rownames(comm),rnorm(1, 250, 75), replace=T, prob=comm[,i]/sum(comm[,i])))))
a<-a[,colnames(a)!="Var1"]
m<-merge(m,a, by="Var2", all=T)
m<-m[,colnames(m)!="Var1"]
colnames(m)[colnames(m)=="Freq"]<-paste("site", i, r, sep=".")
}
#colnames(m)<-c("Var1", paste0("site",c(1:12), r, sep="."))
#names(m)[names(m)=="Var2"]<-paste0("Sample", r,)
rownames(m)<-m$Var2
m
}
#' summarize data for plotting mean/ se
#' @param data data frame with data to be summarized
#' @param varname name of variable with values
#' @param groupnames names of variables for grouping then summarizing
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' data_summary()
data_summary <- function(data, varname, groupnames){
require(plyr)
summary_func <- function(x, col){
c(mean = mean(x[[col]], na.rm=TRUE),
sd = sd(x[[col]], na.rm=TRUE))
}
data_sum<-ddply(data, groupnames, .fun=summary_func,
varname)
data_sum <- rename(data_sum, c("mean" = varname))
return(data_sum)
}
#' summarize data for plotting media + min/max
#' @param data data frame with data to be summarized
#' @param varname name of variable with values
#' @param groupnames names of variables for grouping then summarizing
#' @keywords linear model Species Variance Index
#' @export
#' @examples
#' data_summary2()
data_summary2 <- function(data, varname, groupnames){
require(plyr)
summary_func <- function(x, col){
c(median = median(x[[col]], na.rm=TRUE),
low = min(x[[col]], na.rm=TRUE),
high = max(x[[col]], na.rm=TRUE))
}
data_sum<-ddply(data, groupnames, .fun=summary_func,
varname)
data_sum <- rename(data_sum, c("median" = varname))
return(data_sum)
}
#' function for spike in species 1
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spike1()
spike1<-function(a,b,c,d,e) {
10+(0*(a+b+c+d+e))
}
#' function for spike in species 2
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spike2()
spike2<-function(a,b,c,d,e) {
100+(0*(a+b+c+d+e))
}
#' function for spike in species 3
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spike3()
spike3<-function(a,b,c,d,e) {
1000+(0*(a+b+c+d+e))
}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp1()
spp1<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(a-b)^2 +(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp2()
spp2<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(a-c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp3()
spp3<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(a-d)^2+(0*(a+b+c+d+e))
}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp4()
spp4<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(a-e)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp5()
spp5<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(a+b)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp6()
spp6<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(a+c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp7()
spp7<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(a+d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp8()
spp8<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(a+e)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp9()
spp9<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(b)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp10()
spp10<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(a)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp11()
spp11<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(a-b)^2 +(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp12()
spp12<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(a-c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp13()
spp13<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(a-d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp14()
spp14<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(a-e)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp15()
spp15<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(a+b)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp16()
spp16<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(a+c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp17()
spp17<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(a+d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp18()
spp18<-function(a,b,c,d,e) {(b*d*e)-(a+e)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp19()
spp19<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(b)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp20()
spp20<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(a)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp21()
spp21<-function(a,b,c,d,e) {(a*b)-(a-b)^2 +(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
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#' spp75()
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#' @param e environmental parameter
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#' spp76()
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#' @export
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#' spp77()
spp77<-function(a,b,c,d,e) {(a*c)-(a+d/c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
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#' spp78()
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#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' spp79()
spp79<-function(a,b,c,d,e) {(a*c)-(b)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
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#' spp81()
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#' spp82()
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#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
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#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp83()
spp83<-function(a,b,c,d,e) {(b*c)-(a-d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
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#' @param a environmental parameter
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#' @examples
#' spp84()
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#' @param a environmental parameter
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#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp85()
spp85<-function(a,b,c,d,e) {(b*c)-(a+b/a)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
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#' @examples
#' spp86()
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#' @param a environmental parameter
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#' @examples
#' spp87()
spp87<-function(a,b,c,d,e) {(b*c)-(a+d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
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#' @param a environmental parameter
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#' @examples
#' spp88()
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#' spp89()
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#' spp152()
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#' spp153()
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#' @examples
#' spp154()
spp154<-function(a,b,c,d,e) {(b*e)-(b-e)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
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#' @examples
#' spp155()
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#' spp182()
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#' spp183()
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#' spp188()
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#' spp192()
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#' @param a environmental parameter
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#' @export
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#' spp193()
spp193<-function(a,b,c,d,e) {(d*a)-(b-d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' @param c environmental parameter
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#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp194()
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#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp195()
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#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' @export
#' @examples
#' spp203()
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#' species function
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#' @export
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#' species function
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#' @export
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#' species function
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#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp206()
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#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp207()
spp207<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(c+d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp208()
spp208<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(c+e)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp209()
spp209<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(0)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp210()
spp210<-function(a,b,c,d,e) {(c*d*e)-(50)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp211()
spp211<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(c-b)^2 +(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp212()
spp212<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(c-a)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp213()
spp213<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(c-d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp214()
spp214<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(c-e)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp215()
spp215<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(c/b)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp216()
spp216<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(c/c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp217()
spp217<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(c/d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp218()
spp218<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(c/e)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp219()
spp219<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(0)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp220()
spp220<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(5)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp221()
spp221<-function(a,b,c,d,e) {(a*b)-(c-b)^2 +(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
#' @param c environmental parameter
#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp222()
spp222<-function(a,b,c,d,e) {(a*b)-(c-a)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' @param d environmental parameter
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#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
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#' species function
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#' spp453()
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#' species function
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#' spp465()
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#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' spp466()
spp466<-function(a,b,c,d,e) {(a*e)-(d+c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
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#' spp467()
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spp471<-function(a,b,c,d,e) {(a*c)-(d-b)^2 +(0*(a+b+c+d+e))}
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spp476<-function(a,b,c,d,e) {(a*c)-(d+c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
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#' spp477()
spp477<-function(a,b,c,d,e) {(a*c)-(d+d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
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#' @examples
#' spp485()
spp485<-function(a,b,c,d,e) {(b*c)-(d/a+b/c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
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#' @param a environmental parameter
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#' spp486()
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#' spp487()
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#' spp533()
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#' spp552()
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#' spp553()
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#' species function
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#' species function
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#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' species function
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#' species function
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#' @param a environmental parameter
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#' @param a environmental parameter
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#' @param a environmental parameter
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#' spp615()
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#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
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#' spp616()
spp616<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(2*a)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
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#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp617()
spp617<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(2*b)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp618()
spp618<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(2*c)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' @param e environmental parameter
#' @keywords species function
#' @export
#' @examples
#' spp619()
spp619<-function(a,b,c,d,e) {(d*e)-(2*d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
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#' @export
#' @examples
#' spp620()
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#' @export
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#' spp698()
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#' @param d environmental parameter
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#' spp699()
spp699<-function(a,b,c,d,e) {(d*a)-(2*d)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
#' species function
#' @param a environmental parameter
#' @param b environmental parameter
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#' @param d environmental parameter
#' @param e environmental parameter
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#' spp700()
spp700<-function(a,b,c,d,e) {(d*a)-(2*e)^2+(0*(a+b+c+d+e))}
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